اختبار التشخيص الفطري

توجد الفطريات (الفطريات) على نطاق واسع في الطبيعة. على الرغم من أنه تم وصف ما يقرب من 400000 نوع حتى الآن، إلا أن 100-150 منها فقط يمكن أن تسبب العدوى للإنسان. تسمى الأمراض التي تسببها الفطريات بالفطريات. يسمى الفرع العلمي الذي يدرس الفطريات والأمراض الفطرية علم الفطريات.

الفطريات هي كائنات دقيقة ذات بنية حقيقية النواة. وبما أنها لا تحتوي على الكلوروفيل، فإنها لا تستطيع القيام بعملية التمثيل الضوئي وتختلف عن النباتات بهذه الخاصية. وهي لاهوائية اختيارية أو هوائية إجبارية. الفطريات هي كائنات دقيقة غير متجانسة، مما يعني أنها تستخدم المركبات العضوية كمصادر للكربون والطاقة. فهو يهضم الأطعمة عن طريق إطلاق الإنزيمات المحللة في البيئة الخارجية ويأخذ العناصر الغذائية المهضومة إلى الخلايا من خلال الامتصاص.

تحتوي بعض أنواع الفطر على كبسولات ولها بنية متعددة السكاريد. تتكون كبسولة السكاريد من ثلاثة بوليمرات مختلفة على الأقل: الجلوكورونوكسيلومانان، والجلاكتوكسيلومانان، والمانوبروتين. في الفطريات، يتكون 90% من جدار الخلية من بوليمرات متعددة السكاريد مثل الكيتين والجلوكان والمنان والشيتوزان، و10% يتكون من البروتينات والبروتينات السكرية والدهون. يختلف نوع وكمية السكريات حسب نوع الفطر. جدار الخلية يعطي الخلية شكلها، ويحميها من الصدمة التناضحية، وهو مستضدي وله نشاط فسيولوجي لأنه يحتوي على بعض الإنزيمات. غشاء الخلية عبارة عن هيكل ثنائي الطبقة يتكون من الدهون الفوسفاتية والبروتينات والستيرولات، على غرار أغشية الثدييات. على عكس غشاء الثدييات، فإنه يحتوي على إرغوستيرول وزيموستيرول بدلا من الكولسترول. تشمل وظائف غشاء الخلية حماية السيتوبلازم، وتنظيم تبادل المواد، والمساعدة في تركيب الكبسولة والجدار. الموقع المستهدف لمعظم مجموعة الأدوية المضادة للفطريات المستخدمة اليوم للأغراض العلاجية هو الإرغوستيرول، الموجود في الغشاء.

الأبواغ الفطرية هي المسؤولة عن التكاثر. يحدث التكاثر من خلال الجراثيم الجنسية (zygospore، ascospore، basidiospore)، الجراثيم اللاجنسية (blastospore، arthrospore، chlamydospore، Macconidium، microconidium، sporangiospore) أو parasexually. يعتمد التصنيف العلمي للفطريات على الجراثيم الجنسية. حسب مظهرها المورفولوجي؛ وهي مقسمة إلى قسمين: الخمائر (المبيضات، الفطريات، الخ.) والعفن (الفطريات الزقية، الفطريات الزيجومية، الفطريات الثنائية، الخ.).

 

الاختبارات التشخيصية

يتم إجراء عزل وتحديد مجموعة واسعة من الفطريات من خلال تطبيق الأساليب القائمة على الثقافة وغير القائمة على الثقافة (المصلية والجزيئية). قبل البدء في العلاج المضاد للفطريات، يجب جمع العينات السريرية في ظروف معقمة، وعدم وضعها في الفورمالين، وتسليمها إلى المختبر في حاويات معقمة مع الوسيط الناقل الأكثر ملاءمة للمادة.

نظرًا لطول فترة العلاج نتائج الثقافة التي سيتم الحصول عليها، التقييم المجهري المباشر له أهمية كبيرة. يتم أولاً تقييم العينات السريرية المرسلة إلى المختبر بشكل مجهري، ويتم الحصول على المعلومات الأولية حول وجود الخميرة أو العفن في التقييم المجهري. في الفحص المجهري المباشر، يستخدم KOH بمعدل 10-20-30%، وبشكل عام 30%. كشط الجلد والأظافر والريش والشعر والصوف وقطع الجلد وما إلى ذلك. يضاف KOH إلى المواد المجمعة لإذابة طبقة الكيتين والكشف عن الخيوط الفطرية. للفحص المجهري الملون، يتم استخدام الأصباغ مثل صبغة جرام، والقطن اللاكتوفينول الأزرق، والأبيض كالكوفلور، والحبر الهندي، وفضة جروكوت-جوموري ماتامين، وحمض البيروديك-شيف (PAS)، وجيمسا، ورايت، وماسون-فونتانا. يمكن أيضًا استخدام ضوء وود للبحث عن الفطريات الموجودة على الأسطح المصابة. وهي عبارة عن شعاع فوق بنفسجي يمر عبر مرشح أكسيد النيكل. وتحت هذا الضوء يمكن التعرف على بعض الفطريات بإعطاء ألوان مثل الأصفر الباهت، والأخضر، والأصفر، والأحمر المرجاني.

 

الثقافة هي طريقة تشخيصية أكثر تحديدًا من الطريقة المباشرة. الفحص المجهري. يتم تطبيقه عندما لا يمكن إجراء تشخيص نهائي أو تحديد نوع الفطريات. في تقييم الثقافة، تكون الأولوية هي شكل المستعمرات ولون الصبغة الناتج. تختلف الوسائط المستخدمة اعتمادًا على العينة السريرية المأخوذة. تنقسم وسائط الثقافة إلى أغراض العزل الأولية وأغراض محددة.

أغراض العزل الأولية؛

- Sabauraud-dextrose-agar (SDA) وتسريب قلب الدماغ. أجار.(BHI); يتم استخدامه للعزل الأولي للفطريات المسببة للأمراض والفطريات. بالنسبة للعينات المأخوذة من بيئات غير معقمة، يتم استخدام SDA وBHI مع المضادات الحيوية. تتكاثر خلال 1-4 أسابيع عند درجة حرارة الغرفة و37 درجة مئوية وتشكل مستعمرات تكون عمومًا ذات لون أبيض مصفر أو كريمي، ولها قوام ناعم وعادة ما تكون خميرة وذات رائحة كريهة.

- أجار مثبط للعفن و خلاصة الخميرة الفوسف. أجار الحصان؛ العزل الأولي للفطريات المسببة للأمراض.

أغراض محددة؛

-جيلي دقيق الذرة مع توين 80 والتريبان الأزرق (MUJ)؛ تشخيص جراثيم الكلاميدوس للمبيضات البيضاء،

-أجار تحويل بذور القطن؛ تحول Blastomyces dermatitidis من مرحلة العفن إلى مرحلة الخميرة،

-أجار تشابيك؛ عزلة الرشاشيات،

 

أجار بذور الطيور (أجار ستيب)؛ عزل المستخفية الجديدة،

-CHROMagar Candida؛ عزل أنواع المبيضات على أساس تكوين التفاعل الأنزيمي،

-مرق تخمير الخميرة؛ خصائص تخمر الخمائر

- أجار نيتروجين الخميرة؛ خصائص استيعاب الكربوهيدرات في الخمائر.

بالإضافة إلى ذلك، تعمل طرق BACTEC وBacT/Alert على تسريع اكتشاف الفطريات في مزارع الدم.

 

اختبار الجراثيم الأنبوبية؛ في هذا الاختبار، يتم البحث عن تكوين الأنبوب الجرثومي من الخلايا. يتم عمل معلق خفيف من الكائنات الحية الدقيقة الشبيهة بالخميرة في 0.5-1.0 مل من المصل المعقم وحضنها عند 37 درجة مئوية لمدة 2-4 ساعات. توضع قطرة من الخليط على الشريحة وتغطى بغطاء. يتم فحصه تحت المجهر ما إذا كان الأنبوب الجرثومي قد تشكل من الخلايا. هذه الحالة هي سمة من سمات C. albicans.

تعد اختبارات الكشف عن المستضدات الفطرية أو المستقلبات في المصل أو سوائل الجسم أكثر قيمة للتشخيص المصلي للعدوى الفطرية الجهازية. يمكن الكشف عن الأجسام المضادة عن طريق تراص اللاتكس (LA) وELISA والمقايسة المناعية الإنزيمية (EIA) والمقايسة المناعية الإشعاعية (RIA) وطرق الرحلان الكهربائي المناعي (IE) والانتشار المناعي (ID). مع هذه الأساليب، يتم إنشاء المستضدات في بنية الخلية أو المستقلبات؛ منان، د-أرابينيتول، (1-3)-بيتا جلوكان، متعدد السكاريد جلوكورمانان، جالاكتومانان وإنولاز.

على الرغم من أن طرق التشخيص الجزيئي تحظى بشعبية متزايدة، إلا أن تطبيقها كطريقة روتينية في كل سريري المختبر لأسباب اقتصادية وهو غير شائع بسبب عدم وجود توحيد قياسي. تُستخدم طرق تضخيم الإشارة باستخدام مجسات تضخيم الحمض النووي والتهجين للكشف عن الفطريات المعدية وتحديدها. تستخدم تقنيات تضخيم الحمض النووي تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أو طرق مشابهة. الحمل الفطري منخفض جدًا ولا يتوفر بعد التشخيص المزروع والتشخيص المصلي. ويمكن القول أن طرق التشخيص المعتمدة على تفاعل البوليميراز المتسلسل ستكون أكثر فعالية في المرحلة غير الكافية. يهدف تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT) إلى تضخيم الحمض النووي الريبي (RNA) المستهدف.

قراءة: 0

yodax